Děláme také PCR experimenty, proč jsou výsledky vždy o tolik horší než ostatní?

Děláme také PCR experimenty, proč jsou výsledky vždy o tolik horší než ostatní?

V laboratoři se podívejte na PCR jiných lidí, účinnost amplifikace je vysoká, elektroforetický proužek dokonalý a podívejte se na jejich vlastní, těžko proveditelné po dlouhou dobu, pociťujte, že reakce je velmi dobrá, výsledek falešně pozitivního testu ... problém?

Věřím, že mnoho našich partnerů se také setkalo s různými problémy. Když narazíme na zeď v PCR experimentech, budeme podvědomě analyzovat faktory v reakčním systému, ale často ignorujeme důležitý vliv spotřebního materiálu v experimentech.

Váš výsledek PCR je špatný, hlavním důvodem může být spotřební materiál pro PCR. Na jedné straně způsobí mikro kontaminace spotřebního materiálu nebo zavedení inhibitorů experimentální znečištění; Na druhou stranu nesprávný výběr spotřebního materiálu také utrpí experimentální výsledky.

Problém se znovu opakuje. Existuje mnoho druhů spotřebního materiálu pro PCR, jak tedy vybrat ty správné, aby byl experiment plynulejší? Jakým problémům je třeba věnovat pozornost? Dnes se nebojteI v kombinaci s mnohaletými zkušenostmi a řešením běžných problémů s výběrem spotřebního materiálu pro PCR doufám, že vám pomůžu.

 

Otázka 1: Proč jsou spotřební materiály pro PCR obvykle vyrobeny z PP materiálu?

Huida: Vzhledem k tomu, že zásoby PCR jsou obvykle v přímém kontaktu s reagenciemi nebo vzorky, jsou polypropylenové (PP) materiály biologicky inertní, nelepí se na biomolekuly a mají dobrou chemickou toleranci a teplotní toleranci (lze autoklapnout při 121 ° C, vydrží také změny teploty během tepelného cyklu).

 

Otázka 2: Jak si mám vybrat mezi různými velikostmi zkumavek / destiček PCR?

HUIDA: Účel výběru: vyberte správné produkty podle konkrétních experimentálních požadavků. Většina velikosti zkumavky PCR může splňovat požadavky na reakci PCR. Na tomto základě se doporučuje nejprve zvolit nízkoobjemovou trubici. Protože nízkoobjemová reakční trubka / deska má malý horní prostor, zlepšuje se tepelná vodivost a snižuje se odpařování. Současně je nutné se vyhnout přidání příliš velkého nebo příliš malého množství vzorků. Příliš mnoho může vést ke snížení tepelné vodivosti, rozlití a křížové kontaminaci, zatímco příliš málo může mít za následek ztrátu odpařováním vzorku.

Specifikace a objemy běžných reakčních zkumavek:

Jednoduchá / kombinovaná zkumavka: 0,5 ml, 0,2 ml, 0,15 ml

96jamková destička: 0,2 ml, 0,15 ml

384jamková destička: 0,04 ml

 

Otázka 3: Když je množství vzorku malé, zvolím jednu trubku nebo kombinovanou trubku, ale proč některé mají plochý kryt a některé mají konvexní kryt?

Huida: Je-li množství vzorku malé, upřednostňuje se jedna zkumavka nebo kombinovaná zkumavka. Když je však reakční objem velký, dominuje jediná zkumavka a objem může dosáhnout 0,5 ml. A plochý kryt a konvexní kryt mají výhodu, konkrétní může odkazovat na následující informace.

Jedna zkumavka: 0,2 ml a 0,5 ml; Může flexibilně zvolit množství vzorku.

Spojovací trubice: 0,2 ml nebo 0,15 ml je volitelná; 8 nebo 12 trubek je běžných.

Plochý kryt: může poskytovat přesný přenos fluorescenčního signálu pro qPCR; Snadné psaní značek.

Konvexní kryt: kontakt s horkým krytem nástroje PCR ke snížení deformace reakční zkumavky způsobené tlakem; Ovlivní to však přenos fluorescenčního signálu a nelze jej použít u experimentu qPCR.

 

Otázka 4: Proč mají některé destičky PCR sukně a některé ne?

Huida: Ve skutečnosti je plášť destičky PCR navržen tak, aby se lépe přizpůsobil automatizačním aplikacím a poskytoval stabilní podporu a mechanickou odolnost nástroje, stejně jako vyšší stabilitu během procesu pipetování.

Destičky PCR se obecně dělí na nehemolinové, poloviční a plné hemoliny.

Bez Plate: Vhodné pro většinu strojů PCR nebo qPCR, ale ne pro automatizační aplikace. Stabilita není v procesu pipetování vysoká, proto je nutné ji používat s podložkou.

Poloviční okrajová deska: lze přizpůsobit aplikaci štítků nebo čárových kódů a automatické aplikaci a má dobrou stabilitu při pipetování.

Okrajová deska s plnou sukní: velmi vhodná pro automatizované experimentální aplikace, lze ji také přizpůsobit štítku a aplikaci čárového kódu. Má dobrou mechanickou pevnost, může být použit v přístroji PCR s vypouklým modulem a má vysokou stabilitu v procesu pipetování.

 

Q5 :Proč u PCR destiček nejsou rohy a štítky úplně stejné?

Huida: Závisí to na účinku řezání rohů a značení.

Rohové řezání: Volba polohy pro řezání rohů desky PCR závisí na požadavcích vhodného nástroje pro snadné umístění.

Identifikace: Alfanumerické značky na destičkách PCR pomáhají identifikovat jednotlivé jamky a umístění vzorků. Obecně pro reliéfní barevné digitální logo nebo gravírované logo. U některých automatizovaných aplikací jsou tištěné a označené reakční desky lépe utěsněny.

 

Otázka 6: Proč jsou některé destičky PCR konvexní, zatímco jiné jsou ploché? Který je lepší?

Huida: Co se hodí, je nejlepší. Existují dva druhy běžných destiček pro PCR: okraj s plochými póry a okraj s vysokými póry.

Reakční destička s plochým okrajem, vhodná pro většinu přístrojů PCR.

Reakční destičky se stoupajícími hranami clony usnadňují utěsnění membrány a snižují riziko křížové kontaminace mezi vzorky.

 

Společnost Huida má dlouholeté zkušenosti s výrobou a zpracováním produktů PCR a má vysoké průmyslové standardy. Produktová řada je bohatá a může splňovat drtivou většinu experimentálních aplikací PCR. Přijďte si vybrat ty správné produkty pro vaše experimentální aplikace.

谷歌推广疫情产品PCR


Čas zveřejnění: červen-03-2021